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石蠟切片和冰凍切片的區別你造嗎~

發布時間:2021-05-07瀏覽次數:4821返回列表

石蠟切片與冰凍切片在組織學中,蕞常用到的有石蠟切片與冰凍切片。兩者各有優缺點,在實驗的應用上也有所不同,比如石蠟切片常用于進行免疫組化實驗,冰凍切片常用于免疫熒光實驗。而兩個實驗都是應用免疫學基本原理——即抗原與抗體特異性結合的原理,通過化學反應使標記抗體的顯色劑顯色來確定組織細胞內蛋白質,對其進行定位、定性及相對定量的研究。下面詳細介紹下兩種方法的異同點。



一.石蠟切片

石蠟切片組織學常規制片技術中蕞為廣泛應用的方法。常用于觀察正常細胞組織的形態結構。一般的組織從取材固定到封片制成玻片標本需要數日,但標本可以長期保存使用,是一種永-久性顯微玻片標本。

1、固定:將新鮮組織切成小塊,固定于4%多聚甲醛過夜。

原理:固定時間則根據材料塊的大小及松密程度而定。固定可以凝固組織中的物質成分、終止細胞的一切代謝過程、防止細胞自溶或組織變化,盡可能保持其活體時的結構。同時能使組織硬化,有利于切片的進行。

2、脫水:為了減少組織材料的急劇收縮,應使用從低濃度到高濃度遞增的順序進行經70%、85%、95%直至純酒精(無水乙醇),每次時間為1小時。

原理:固定后的組織材料需除去留在組織內的固定液及其結晶沉淀,否則會影響后期的染色效果。原因在于透明劑多數是苯類,苯類和石蠟均不能與水相融合,水分不能脫盡,苯類無法浸入。酒精為常用脫水劑,它既能與水相混合,又能與透明劑相混。

3、透明:常用的透明劑有二甲苯,二甲苯是石蠟的溶劑。此步蕞好在通風廚進行。

原理:純酒精不能與石蠟相溶,還需用能與酒精和石蠟相溶的溶劑,替換出組織內的酒精。材料塊在透明劑浸漬過程稱透明。

4、浸蠟:先把組織材料塊放在熔化的石蠟和二甲苯的等量混合液浸漬1小時。先后移入2個熔化的石蠟液中浸漬1小時左右。

原理:使石蠟浸入組織而起支持作用。

5、包埋:以少許熱蠟液將其底部迅速貼附于包埋盒內上,然后置于速凍臺,讓石蠟固定。

6、切片:切片刀的銳利與否、蠟塊硬度是否適當都直接影響切片質量,可將蠟塊至于冷水中改變蠟塊硬度。通常切片厚度為5微米,用毛筆輕托輕放在37度水浴中展片。

7、貼片與烤片:將水浴中展片撈至玻片上鋪正,然后將載玻片放入37℃溫箱中干燥。

8、切片脫蠟及水化:干燥后的切片置于二甲苯中進行脫蠟,然后依次使用從高濃度到低濃度遞減的順序進行經純酒精、95%、85%、70%進行水化。

原理:切片需脫蠟及水化才能在水溶性染液中進行染色。用二甲苯脫蠟,再逐級經純酒精及梯度酒精直至蒸餾水。

9、染色:染色的目的是使細胞組織內的不同結構呈現不同的顏色以便于觀察。

經典的蘇木精和伊紅:細胞核被蘇木精染成紫藍色,多數細胞質及非細胞成分被伊紅染成粉紅色。實驗操作簡單。

免疫組化:指帶顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的呈色反應。

二.冰凍切片

冰凍切片, 優點是能夠較好的保存組織的抗原免疫活性,做免疫組化時不需抗原修復這一步。 缺點是細胞內易形成冰晶而破壞細胞結構,可能會使抗原彌散。因其制作過程較石蠟切片快捷、簡便,而 多應用于手術中的快速病理診斷。

冰凍切片相比較于石蠟切片簡單易行,一般進行固定脫水后,固定于包埋劑就可以在冰凍切片機進行切片。有些新鮮標本可以直接取材后,冷凍托涂包埋劑后置于冷凍托上速凍,凍好后立即切片。

冰凍切片蕞重要的是防止樣品中冰晶的出現,一般可以通過速凍的方法使組織溫度驟降,減少樣品內冰晶的形成。也可以將組織置于20%~30%蔗糖溶液l~3天,利用高滲吸收組織中水分,減少組織含水